开云体育 kaiyun.com 官网入口开云体育 kaiyun.com 官网入口毕 业 设 计（论文） 2011 届 题    目    野菊花提取物明胶微球  的研究及处方优化     专    业      制药

　　学生姓名        张威        学    号      07092204       指导教师        肖  莉        论文字数              完成日期  20 年 月 日   湖 州 师 范 学 院 教 务 处 印 野菊花提取物明胶微球的研究及处方优化 07092204  张威 （湖州师范学院生命科学学院， 湖州  313000） 摘要：黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。野菊花提取物由超声法获得，研究通过乳化-交联技术制备野菊花提取物明胶微球。以提取物中的黄酮作为测量指标，通过紫外分光光度法测定微球的载药量，计算微球的包封率，用光学显微镜观察微球表面形态，计算微球的直径。研究表明：明胶浓度，乳化剂含量，搅拌速度等因素对明胶微球的载药量，包封率等有不同程度的影响。通过正交设计，考察了各因素对微球性质的影响。筛选出制备菊花提取物明胶微球的最佳工艺，并对工艺重现性进行研究，重现性良好。 关键字：野菊花，黄酮，明胶微球，载药量，包封率 wild chrysanthemum extract gelatin microsphere preparation and formulation optimization 07092204  zhang wei （School of Life Science，Huzhou Teachers College，Huzhou  313000 ） Abstract：flavonoids general reference to two phenolic hydroxyl groups of the benzene ring (A-andB-)which interconnect to a serirs of compounds by the central three carbon atoms,the basic nucleus is 2-phenyl-chromone.wild chrysanthemum extract obtained by the ultrasonic.The emphasis of the study on the preparation of wild chrysanthemum extract gelatin microsphere by emulsion cross link technique.we served the flavone in the extract as measurement index,determination the drug loading of microsphere by UV Spectrophotometry,calculate the entrapment efficiency of microsphere,observe surface morphology of microsphere by optical microscope and calculate microsphere’s diameter.Studies have shown that： gelatin concentration, emulsifier content, stirring speed and other factors on gelatin microspheres containing the drug content, encapsulation efficiency, etc. have different degrees. By orthogonal design, study of various factors on the properties of microspheres.. Filtering out the preparation of wild chrysanthemum extract optimum gelatin microspheres.and process reproducibility study,Reproducibility is good. Key words：wild chrysanthemum，flavonoids， gelatin microspheres， the drug loading， encapsulation efficiency 目 录 1 引言    3 2材料与方法    4 2.1 药材、实验试剂及仪器    4 2.1.1 药材 2.1.2 实验试剂 2.1.3 实验仪器 2.2 实验方法与

　　指标    5 2.2.1 野菊花提取物的提取 2.2.2 野菊花提取物中黄酮含量的测定 2.2.3野菊花提取物明胶微球处方前研究 2.2.4 明胶微球质量评价指标 2.2.5 实验结果讨论 2.3 野菊花提取物明胶微球制剂工艺的研究    7 2.3.1 制备工艺的单因素考察 2.3.2 正交实验 2.3.3 正交实验设计 2.3.4 制备工艺及重现性的考察 2.3.5 讨论与小结 3. 总结与展望    13 3.1 总结    13 3.2 展望    13 参考文献    13 致  谢    15 1 引言 野菊花是菊科植物野菊花的干燥头状花序 ，在我国各地均有分布 。其性微寒、味苦，归肺、肝二经 ，具有疏风清热 、平肝明目的功效。现代药理研究表明，野菊花具有降血压、扩张冠状动脉、防止冠脉粥样硬化等作用，临床用于治疗高血压和冠心病 。野菊花被称为中草药 中的“广谱抗生素”，入药或茶饮 ，能防治感 冒、菌痢、肠炎、便秘等多种疾病 ，因其产量高 、价格便宜、饮用方便 ，已作为保健饮料广为应用 。黄酮类化合物是野菊花中非常重要的一类次级代谢产物，具有多种药埋作用 ，其中包括抗 氧化作用、抗病毒作用、消炎作用和抗基 因诱变作用 ，是治疗心血管疾病药物的主要成分，对心血管疾病 、免疫系统疾病有显著药理作用。黄酮类化合物作 为野菊花的有效成分，其药理作用与所含的黄酮成分密不可分 。 黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。天然黄酮类化合物多以苷类形式存在 ，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰化糖。黄酮苷固体为无定形粉末，其余黄酮类化合物多为结晶性固体。 黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这是由于其母核内形成交叉共轭体系，并通过电子转移、重排，使共轭链延长，因而显现出颜色。黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中；但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。糖链越长则水溶度越大。黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱因酚羟基数目、位置而异。黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、也可阻止癌症的发生。 黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇这些作用大大降低了心血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。 图 1-1  黄酮类化合物化学结构式 明胶（Gelatin）是以新鲜牛皮和猪皮为原料，采用全套不锈钢设备，严格筛选鲜骨皮，通过反复洗浸、脱脂中和、蒸煮液化、灭菌过滤、浓缩烘干等几十道工序流水线制成的。它是一种无味、无色（略带浅黄色）、半透明、坚硬的非晶态物，其不溶于有机溶剂，它吸水性强、粘度高，明胶是肽分子聚合物质，是胶原蛋白质的水解产物，所以可作为一种添加剂。组成明胶的蛋白质中含有18种氨基酸，其中7种为人体所必需。其无味，无臭。在冷水中吸水膨胀。它的分子量为1-7万，高级明胶分子量在10-15万以内。明胶是一种含硫氨酸很低而内氨酸、甘氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸等含量很高。明胶不易溶于冷水，但能吸收冷水的重量却是自身的5-10倍，易溶于温水，冷却形成凝胶，胶熔点在24-28°C之间，其溶解度与凝固温度相差很小，易受水份、温度、湿度的影响而变质。 明胶（Gelatin）是胶原的水解产物，是一种无脂肪的高蛋白，且不含胆固醇，是一种天然营养型的食品增稠剂。明胶无毒、几乎无抗原性，生物降解性、生物兼容性、生物粘附性好，价格便宜，是一种制备微球的良好的天然聚合物材料。因此，用明胶制备的微球具有一系列优良的特性，如无毒、可生物降解、功能基特性、生物粘附性、靶向性等。明胶微球在生物、医学、化工等领域有着广泛的应用。 明胶微球可以作为多种药物的载体，提高药物稳定性、控制药物释放、靶向给药、掩盖药物的不良气味及口味，治疗鼻炎、栓塞 、肿瘤等多种疾病。明胶微球用放射性元素或者荧光物质标记后，可注入体内用于医学的显影、示踪研究。将生物酶固定在明胶微球载体上，就可以减少其在反应过程中的损耗，有利于酶的重复利用，同时增强了它的稳定性。由于明胶自身的溶胶一凝胶特性等，制备出的明胶微球还可用作制备其它材料微球的

　　。 本实验意在探讨应用明胶制备野菊花提取物明胶微球，异黄酮作为测量指标，以载药量和包封率为重要的衡量指标，采用乳化—交联技术制备黄酮明胶微球，利用正交设计方法研究制备明胶微球的最佳处方工艺，紫外吸收光谱对明胶微球载药量进行检验，同时以重现性实验和批内与批间均一性实验来考察工艺的稳定性，并为以后的中试实验以及工业化生产提供一定的理论依据。 2材料与方法 2.1 药材、实验试剂及仪器 2.1.1 药材 野菊花，市售，产地辽宁，亳州中药饮片厂加工。 2.1.2 实验试剂 表2-1 实验试剂的纯度和产地 药 品 纯 度 产 地 95%乙醇 分析纯   明胶 化学纯 上海精析化工科技有限公司 司盘80 分析纯 天津化学试剂有限公司 戊二醛（25%） 分析纯 上海化学试剂采购供应五联化工厂 液状石蜡 分析纯 常州市长润石油有限公司 异丙醇 分析纯 杭州市双林化工试剂厂 氢氧化钠 分析纯 杭州萧山化学试剂厂 亚硝酸钠 分析纯 上海振欣试剂厂 硝酸铝 分析纯 上海振欣试剂厂 蒸馏水 分析纯 实验室制备       2.1.3 实验仪器 表2-2 仪器的型号和产地 仪 器 产 地 UV-180pc扫描型紫外分光光度计 上海美谱达仪器有限公司 KQ-l00B型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 FA1104分析天平 上海良平仪器仪表有限公司 JJ-1精密增力电动搅拌器 常州国华电器有限公司 ZNHW-2型电热套 郑州长城科工贸有限公司 Wk-200B高速药物粉碎机 青州市精诚机械有限公司 GZX-9030MBE数显鼓风干燥箱 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 SHB-3循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司 RE-52A旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂 DK-S24型电热恒温水浴锅 上海森信实验仪器有限公司 各种玻璃仪器 宁波市化学有限公司 冰箱 青岛海尔股份有限公司     2.2 实验方法与评价指标 2.2.1 野菊花提取物的提取 提取工艺流程：菊花（65℃ 的烘箱中干燥至恒重）——粉碎(20目)——浸泡——超声处理——抽滤——减压蒸馏——得提取物 2.2.2 野菊花提取物中黄酮含量的测定 提取工艺流程：菊花（65℃ 的烘箱中干燥至恒重）——粉碎(20目)——浸泡——超声处理——抽滤——减压蒸馏——干燥——计算出膏率——溶解——定容——测吸光度值——计算黄酮类物质的含量。 ① 波长的选择 精密称取适量芦丁对照品置于含无水乙醇溶液中超声溶解，紫外分光光度法在300nm-600nm波长范围内扫描。将辅料适量制成不含药物的模拟溶液，在510测定有无吸收说明辅料对样品的测定无干扰。 ②

　　曲线℃干燥至恒重的芦丁对照品25 mg置 100 mL容量瓶中，加适量 乙醇，使充分溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每毫升含芦丁对照品0.25mg）照品溶液 3．0 mL、4．0 mL、5．0 mL、6．0 mL、7．0 mL，分别置于 25 mL容量瓶中，加5％亚硝酸钠溶液1．0 mL摇匀，放置 6 min，加 10％硝酸铝溶液1．0 mL，摇匀，放置 6 min，加氢氧化钠试液 10．0 mL，再加水至刻度摇匀，放置 15 min，以相应的试剂溶液为空 白，在510 nm处测定吸光度。以对照品溶液浓度 c和吸光度 A进行线性回归，得回归方程 A=________ ③菊花中黄酮提取物浸膏质量测定 准确称取6g菊花粉末于500ml烧杯中，加入55%体积分数30ml的乙醇溶液，浸泡24h，在超声波温度为50℃的条件下，提取1h，减压抽滤。弃滤渣，滤液减压蒸馏得浸膏液，称取浸膏的质量。 ④单位质量菊花中黄酮含量的测定。根据文献以选取最佳因素组合的条件下提取黄酮。 准确称取1．000 g菊花粉末于100 mL烧杯中，加入55%体积分数30ml的乙醇溶液，浸泡24h，在超声波温度为50℃的条件下，提取1h，减压抽滤。弃滤渣，滤液减压蒸馏得浸膏液，干燥浸膏液，浸膏加一定体积分数的乙醇溶解，用一定体积分数的乙醇定容于100 mL容量瓶中，摇匀。精密量取5mL，置25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为待测液。按照标准曲线方法进行操作测定黄酮含量。重复以上步骤5次，取平均值。 2.2.3野菊花提取物明胶微球处方前研究 ① 空白明胶微球的制备 采用乳化-化学交联法制备空白明胶微球。将明胶制成水溶液作为分散相 ，液体石蜡作为分散介质，span - 80作为乳化剂 ，将分散相均匀地分散于介质中 ，通过机械搅拌乳化形成所需大小的乳滴（w/o）乳化一段时间，转入冰水浴，然后加入戊二醛交联固化，异丙醇脱水，洗涤过滤干燥即得微球。 ② 野菊花提取物药物明胶微球的制备 a药物明胶溶液制备：取2g明胶固体置于烧杯中，加少量蒸馏水15mL，在55摄氏度左右水浴中加热并不断搅拌，取野菊花提取物浸膏（由6g野菊花粉末提取，约含黄酮56mg），将其加入到明胶溶液中，充分搅拌混匀。 b乳化阶段：取50mL液状石蜡置于三颈烧瓶中，然后加入5mLspan80，装上电动搅拌器及恒温水浴装置，调至水浴温度50摄氏度，使液体石蜡与span80混匀，在搅拌下缓慢滴加预热到同样温度的明胶溶液，控制一定的搅拌速度。 c交联阶段后处理：乳化10min后形成w/O型乳化剂，立刻转移至0摄氏度冰水浴中，待乳剂温度降至10摄氏度以下时，加入一定量的（6mL，25%）戊二醛交联固化一定时间，并继续搅拌开云APP 开云官网入口1h，滴加8mL异丙醇，继续搅拌10min，停止搅拌，抽虑，以异丙醇清洗3次，干燥后即得黄色粉末状明胶微球。 ③微球的溶解方法 野菊花中提取物明胶微球的含量测定方法采用紫外分光光度法。精密称取适量野菊花提取物明胶微球，将其充分研磨，取适量溶解于少量的蒸馏水中，在50摄氏度条件下超声30min，在加入无水乙醇，这样才能使微球中的药物充分溶解出来。 2.2.4 明胶微球质量评价指标 ①微球大小 微球的粒径分布对于影响药物在体内的分布与释放非常关键，故它是评价微球质量的一个重要指标。微球形态观察及粒径测定  通过光学显微镜观察，以微球的圆整度，粒径，粘连程度，流动性综合评分为评价指标。 具体操作：以蒸馏水为溶剂，使制得的各明胶微球分散均匀，将微球混悬液滴于载玻片上，盖上盖玻片，用带标尺的光学显微镜在放大100倍和400倍条件下观察微球外光形态，并在视野范围内随即统计100个微球的球径，计算微球平均粒径。 ②微球包封率和载药量的测定 载药量(Drug loading，DL)系指微球中所含药物重量的百分比。载药量高，才能保证有足够量的药物达到治疗目的：载药量越低，则临床使用剂量相应就越高，故应尽量提高载药量以减少病人服用药剂的重量。 包封率(Loadinge efficiency，LE)系指载带于微球中药物量与体系中投入总药物量的百分率。包封率越高说明工艺制备方法越好，制备过程损失小，可减少服用药剂的总重量；包封率低，则说明药物在微球制备过程中损失大，故应尽量提高包封率。 本实验测定载药量、包封率的方法是：精密称取50mg明胶微球，将明胶微球充分研磨均匀后，置于烧杯中加入少量55%浓度的乙醇溶液，在50摄氏度下超声30min，后转移至100ml容量瓶中定溶至刻度，混合均匀后待其冷却让溶液静置10mim，抽虑，在510nm波长处测吸光度，再根据前述标准曲线测微球中黄酮的含量，根据公式①、②算出微球的包分率和载药量。 微球产率% =微球重量 / 投药量 + 明胶量 ×100% 微球包封率% =微球中药物的总量 / 投药量 ×100%                              ① 微球载药量% =微球中药物的总量 / 微球重量 ×100%                            ② 2.2.5 实验结果讨论 （1）最大吸收波长的选择 测得在510±2nm处有最大吸收。将辅料适量制成不含药物的模拟溶液，在510nm处测定有无吸收，说明辅料对样品的测定无干扰。故选择510nm作为含量测定的波长。 （2）标准曲线的制备 将吸收度（A）为横坐标，浓度（C）为纵坐标，做回归分析，得标准曲线方程， 结果见以下图和表。 表2-1  黄酮在55%乙醇中的吸光度 C(μg/ml) 30 40 50 60 70 A 0.389 0.516 0.650 0.772 0.899             得回归方程 A=0．0127C+ 0．00976，其中r=0．9995，可知线）单位质量菊花中黄酮含量的测定 表2-2  单位质量菊花中黄酮的含量 编号 1 2 3 4 5 平均值 A 0.249 0.258 0.243 0.261 0.247 0.250 黄酮含量 0.0129 0.0130 0.0128 0.0131 0.0129 0.0129               每一次单一实验从6.000g菊花中提取黄酮，所以每次投入的黄酮药量为5.675mg. 2.3 野菊花提取物明胶微球制剂工艺的研究 考虑到诸多因素对微球形成和质量的影响，本研究在预试验基础上。选取影响微球性质较显著的5个因素作为考察对象，即搅拌速度、明胶浓度、乳化剂用量、乳化时间和油水两项体积比。以平均粒径、载药量、包封率为考察指标。根据正交设计试验结果优选出最佳处方工艺条件。 2.3.1 制备工艺的单因素考察 （1）搅拌速度的考察 改变搅拌速度，分别为500r/min，700r/min，1000r/min，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 (2) 明胶浓度的考察 改变明胶溶液的浓度，分别为15%，20%，25%，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 (3)乳化剂剂用量的考察 改变改变乳化剂span80的用量，分别为2ml，3ml，4ml，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 （4）乳化时间的考察 改变固化时间，分别为10min、15min、20min，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 (5)油水两相体积比的考察 改变司盘80和液状石蜡的体积比，分别为4：1，5：1，6：1，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 2.3.2 正交实验 正交实验设计(Orthogonalex perimentalde sign)是研究多因素多水平的一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。日本著名的统计学家田口玄一将正交试验设计的水平组合列成表格，成为正交表。正交表是一整套规则的设计表格，用Ln(tc)表示，其中L为正交表的代号，n为实验的次数，t为水平数，c为列数，也就是可能安排最多的因素个数。本试验中运用正交设计助手11v3.1软件，处理所得的正交试验的结果，这是一款针对正交试验设计及结果分析而制作的专业共享软件。 (1) 实验设计 在单因素实验基础上，选择对微球质量影响较显著的四个因素作为考察对象，即搅拌速度（A）明胶溶液浓度(B)、乳化剂用量(C)、乳化时间(D)、油水两相体积比(E)。根据正交设计的原理，制定5因素3水平正交实验场(34)。因素及水平的设计见表2-3。 表2-3  正交设计实验的因素水平表 因素 搅拌速度 明胶浓度 乳化剂用量 乳化时间 油水两项体积比 A(r/min) B（g/ml） C（ml） D（min） E 水平1 500 0.15 2 10 3：1 水平2 700 0.20 3 15 4：1 水平3 1000 0.25 4 20 5：1   (2) 评价：对于野菊花提取物黄酮明胶微球，有两相作为我们选择最优处方的指标：质量和产率。质量一般可以通过微球的载药量、包封率、平均粒径等指标的加权求和值来衡量，通常该值越大，其质量越好；而产率即产量。质量为第一指标，产率其次。因此将实验结果通过质量和产率两个指标来综合制定最佳实验

　　。 （3）单因素考察结果 ①搅拌速度的考察  改变搅拌速度，分别为500r/min，700r/min，1000r/min，明胶浓度0.2g/L水油比1：5，乳化时间15min，乳化剂浓度2mL，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 表2-4  不同搅拌速度影响比较 微球的型号 搅拌速度 （r/min） 粒径大小 (μm) 包封率 （%） 载药量 （%） 001 500 52.32 50.87 0.081 002 700 47.54 49.30 0.073 003 1000 39.89 48.98 0.079           搅拌速度对微球制备工艺有较显著的影响，所制得微球的平均粒径随搅拌速度的加快而减小。这是由于搅拌速度越快，所形成的剪切力越大，乳化获得的乳液液滴就较小，因而固化后所得的微球粒径较小，但转速过大时会影响微球的圆整度和粒径分布。 ②明胶浓度的考察  改变明胶溶液的浓度，分别为0.15/ml， 0.20/ml，0.25ml以700r/min 为搅拌速度， 水油比1：5，乳化时间15min，乳化剂浓度2mL，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 表2-5  不同明胶浓度影响比较 微球的型号 明胶浓度 （g/ml） 粒径大小 (μm) 包封率 （%） 载药量 （%） 004 0.15 29.87 41.52 0.073 005 0.20 47.98 51.30 0.091 006 0.25 62.45 52.98 0.087           明胶浓度对微球制备工艺的影响较大，在一定范围内，随明胶浓度增大，微球平均粒径增大这是因为明胶浓度越大，其分子在乳液中所占比例和互相碰撞的机会就越大，更易形成粒径大的微球。 ③乳化剂用量的考察    改变乳化剂span80的用量，分别为2ml，3ml、4ml， 700r/min 为搅拌速度，明胶浓度为0.2g/ml，水油比1：5，乳化时间15m开云APP 开云官网入口in，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 表2-6  不同乳化剂用量影响比较 微球的型号 乳化剂用量 （ml） 粒径大小 (μm) 包封率 （%） 载药量 （%） 007 2 48.10 43.98 0.087 008 3 39.26 50.20 0.108 009 4 30.98 47.12 0.092           微球的平均粒径随乳化剂加入量的增加而减小，span80作为表面活性剂，包裹在明胶表面成为胶束，将戊二醛吸附到其中进行交联反应，可以很好地控制微球形状，当其用量超过液体石蜡值时，它除和明胶形成胶束外，还在液体石蜡中生成新的胶束，使一部分戊二醛进入到单独存在的胶束中，使溶液中单独的戊二醛增多，系统黏度过大，交联后呈现大小不均的状态。    ④乳化时间的考察  改变固化时间，分别为10min、15min、20min，以700r/min 为搅拌速度，明胶浓度为0.2g/ml做水相，2ml乳化剂用量，其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 表2-7  不同乳化时间影响比较 微球的型号 乳化时间 （min） 粒径大小 (μm) 包封率 （%） 载药量 （%） 010 10 47.45 49.98 0.092 011 15 46.98 50.10 0.091 012 20 46.77 49.85 0.089           微球制备过程中，随乳化时间的增加，微球粒径变小，但变化不是很明显。若乳化时间过短，液滴之间存在黏连现象，会造成微球表面不够平滑圆整度不好且粒径较大。 ⑤油水两相体积比的考察  改变液状石蜡和司盘80的体积比，分别为3：1，4：1，5：1，以700r/min 为搅拌速度，明胶浓度为0.2g/ml做水相，2ml乳化剂用量，乳化时间为15min，在其他条件不变的情况下制备得到三种不同型号的微球，以微球的粒径大小、载药量和包封率为考察指标。 表2-8  不同O/W的影响比较 微球的型号 O/W 粒径大小 (μm) 包封率 （%） 载药量 （%） 013 3：1 31.67 46.97 0.081 014 4：1 40.98 53.87 0.098 015 5：1 48.32 53.12 0.106           水油比例越小越有利于水相分散成较小的液滴；水油比越大，油相的分散能力越小，形成的液滴越大，固化之后得到的微球就越大。水油相比例直接决定了乳液的稳定性和分散性，对工艺影响较大水相比例较大时，微球流动性不好，有黏连现象，因而制得的微球粒径较大分布不均匀且圆整度不好综合考虑。 2.3.3 正交实验设计 根据单因素试验考察数据，在搅拌速度、反应原料的种类及外界条件固定的条件下，进行以下试验。选取影响微球性质较显著的3个因素作为考察对象，即明胶浓度（A）、乳化剂用量（B）、油水两项体积比（C）以平均粒径、载药量、包封率为考察指标，每个因素选定3个水平进行正交试验.因素见表. 表2-9  正交实验因素设计表 因素 明胶浓度A(%) 乳化剂用量B(mL) 油水两项体积比C 水平1 水平2 水平3 15 20 25 2 3 4 3：1 4：1 5：1         根据正交实验设计，选择L9（34）正交表，通过L正交试验设计，优选最佳工艺条件，试验结果如表2-10所示，黄酮明胶微球的质量以微球的产率、平均粒径，包封率，载药量为考察指标 表2-10  正交设计实验与结果 序号 A B C 产率（%） 平均粒径(μm) 包封率（%）载药量（%） 1 1 1 1 84.36 27.78 36.69 0.083 2 1 2 2 93.79 30.11 41.99 0.085 3 1 3 3 84.83 35.67 47.52 0.106 4 2 2 3 72.50 47.10 53.16 0.120 5 2 3 1 80.44 45.19 54.24 0.110 6 2 1 2 82.19 41.99 54.08 0.107 7 3 3 2 77.27 59.87 53.66 0.099 8 3 1 3 76.62 63.23 53.67 0.104 9 3 2 1 75.77 62.32 53.50 0.100   由实验结果可以看出，影响愈创木酚甘油醚明胶微球质量的因素顺序为A

　　C，最佳试验方案 为A2B3C3；影响愈创木酚甘油醚明胶微球产率的因素顺序A

　　B，最佳试验方案为A1C2B1。虽然在此两种指标下的最优方案并不完全一致，但由于对微球而言，质量因素比产率因素更为重要，因此，确定最优方案为A2B3C3，即明胶的浓度为20%，乳化剂用量4ml，油水两相体积比为5：1。 表2-11  最佳水平组合表 实验号 平均粒径/μm S1 包封率/% S2 载药量/% S3 质量指标 S2+S3 产率指标 /% 1 27.78 36.69 0.083 35.43 75.40 2 30.11 41.99 0.085 39.84 83.78 3 35.67 47.52 0.106 41.25 90.98 4 47.10 53.16 0.120 43.88 75.83 5 45.19 54.24 0.110 44.22 77.98 6 41.99 54.08 0.107 50.16 79.48 7 59.87 53.66 0.099 49.34 74.83 8 63.23 53.67 0.104 47.12 78.43 9 62.32 53.50 0.100 50.78 87.42             表2-12  最佳水平组合表 实验号 A B C 质量指标 S2+S3（%） 产率指标 /% 1 1 1 1 36.773 84.36 2 1 2 2 42.075 93.79 3 1 3 3 47.626 84.83 4 2 1 2 53.280 72.50 5 2 2 3 54.350 80.44 6 2 3 1 54.187 82.19 7 3 1 3 53.759 77.27 8 3 2 1 53.774 76.62 9 3 3 2 53.600 75.77 K1j 126.47 144.44 144.43 因素主次 A-B-C K2j 161.82 148.65 149.73 K3j 161.13 155.42 154.35 最优方案 A2B3C3 K1j /3 42.16 48.15 48.14 K2j /3 53.94 49.55 49.91 K3j /3 53.71 51.81 51.45 R(质量指标） 11.78 3.66 3.31 K1j 262.98 243.17 240.57 因素主次 A-C-B K2j 235.13 242.06 253.25 K3j 229.66 242.34 233.95 最优方案 A1C2B1 K1j /3 87.66 81.06 80.19 K2j /3 78.38 80.69 84.42 K3j /3 76.55 80.85 77.18 R(产率指标） 11.11 0.37 6.44             2.3.4 制备工艺及重现性的考察 ⑴明胶溶液的制备：取2g明胶固体置于烧杯中，加少量蒸馏水10ml后，在55摄氏度左右水浴中加热并不断搅拌，明胶溶解。 ⑵将6.000g菊花粉末的提取物浸膏加入到热的明胶溶液中，充分搅拌混匀，成A液。 ⑶取50ml液状石蜡置于三颈烧瓶中，另取4ml司盘80加入液蜡，将混合物置于50摄氏度的水浴中加热。启搅拌器，使其预热搅拌混合均匀，制成B液。 ⑷在快速搅拌下，将A液滴加至B液中。 ⑸乳化15min后形成W/O型乳化剂，立即转移至冰浴，搅拌1h。 ⑹滴加6ml25%戊二醛，并继续搅拌1h。 ⑺滴加8ml异丙醇，继续搅拌10min。 ⑻停止搅拌，抽滤，以异丙醇清洗3次，干燥后即得黄色粉末状明胶微球。 表2-13 最佳制备工艺的重现性 实验号 平均粒径（μm） 包封率(%) 载药量(%) 产率(%) 1 48.34 54.55 0.103 79.35 2 47.99 55.12 0.099 78.98 3 48.21 54.23 0.107 80.01           将该工艺重复3次，考察制备工艺的重现性，结果如表。此制备工艺的重现性良好， 控制好以上各工艺参数，就可以制备出符合要求的微球。 2.3.5 讨论与小结 (1) 溶剂的选择 本文开始就介绍了黄酮易溶于乙醇或氯仿，实验证明用乙醇做溶剂同用甲醇做溶剂在测定含量的准确度方面没有太大的区别。甲醇的毒性比乙醇更大，也更容易挥发。（乙醇沸点78.5摄氏度，氯仿64.5摄氏度）因此，使用时更容易引起大气污染。综上所述，本实验用乙醇作为溶剂。 (2) 紫外分光光度法测药物含量 要测定微球中药物的含量，需先将载体材料溶解，药物才能释放出来。本实验中的载体材料为明胶，易溶于温水，为了促进明胶微球溶解，先将其研磨均匀，将粉末置于55摄氏度热水中充分搅拌，并超声30mim，待药物与明胶碎片溶解后，加入无水乙醇。由于黄酮在乙醇中的溶解度大于水中的溶解度，所以用乙醇提取。因此，为使微球中的药物能充分溶解出来。 (3) 载药量和包封率 在载药微球的制备过程中，药物通常会从油相及固相微球中泄漏一部分，因此载药微球的药物包封率不可能达到100%。载药微球的包封率受到药物在油相和水相中的溶解度、药物在包含聚合物相与不包含聚合物相中的分配系数、各相粘度、微球大小及乳化剂的性能和浓度的影响。本次实验不是以纯黄酮作为药物制成明胶微球，而是从菊花中提取的混合物作为药物制成明胶微球，异黄酮作为测量指标，计算微球的载药量和包封率。 3. 总结与展望 3.1 总结 通过大量的实验，结合理论分析，得出以下结论： 1 本课题以明胶为载体，利用乳化—交联法制备菊花提取物明胶微球，以提取物中的黄酮作为测量指标，制得微球分散状态和流动性均较好，微球的形态圆整，表面光滑，粒径分布集中。 2 以微球的载药量、包封率和产率作为质量指标，在三因素三水平下，通过正交实验，得到最佳制备工艺：明胶的浓度为20%，油水相体积比为5：1，乳化剂span80为4ml。并且对此工艺进行重现性考察，重复3次后，结果比较稳定，重现性好。 由于实验条件和时间的限制，本课题仅野菊花提取物明胶微球的制备工艺进行研究，未能对明胶微球体外溶出试验进行考察，在今后的学习中，可从这方面继续研究。 3.2 展望 本实验应用明胶作为载体得到的黄酮为有效成分的明胶微球，不仅改善了药物在体内的缓释作用，而且改善药物的不良反应和刺激性。但总的来说应用微球技术改善药物的某些缺陷，开发研制药物新剂型、新品种有着良好的前景。近年来，明胶微球技术在中西药制剂的研究和开发中的应用日益广泛，但我国在开发应用明胶微球产品方面，与日、美等国家相比，有很大的差距，应引起广大科研工作者，特别是从事医药研究人员的高度重视。 参考文献 [1] 秦大伟, 李树英, 孟霞等. 嘉白菊总黄酮醇提工艺研究[J]. 山东轻工业学院学报,2008,22(1): 74-76 [2] 赵 进, 罗建华, 刘 娇等. 超声波提取野菊花总黄酮及鉴别[J].时珍国医国药,2007,18(5): 1187-1188 [3] 罗显华, 郁建生, 杨政水. 野菊花总黄酮提取工艺的比较[J].安微农业科学,2007,35(26): 8116—8117 [4] 吴桂霞, 王志杰, 杨秀芳. 菊花中黄酮类化合物超声强化提取工艺参数的研究[J]. 陕西科技大学学报,2007,25(4):56-63 [5]王振忠, 武文洁. 野菊花总黄酮提取工艺的响应面设计优化[J]. 时珍国医国药, 2007,18(3): 648-650 [6] 于 莲, 张传美, 李爱臣等. 参芎明胶微球的制备工艺研究[J]. 时珍国医国药, 2010, 21(3): 667-668 [7] 唐 磊, 王高磊, 田忠贞等. 鼻粘膜给药用明胶微球的制备[J]. 济南大学学报, 2010,24(1):75-78 [8] 李仲谨, 张 莎, 周 亮等. 明胶微球的制备及其粒径影响因素的研究[J]. 食品科技, 2010, 35(1):30-32 [9] 鲁定国, 刘 韶, 雷 霆等. 莲心总碱阿霉素明胶微球的制备研究[J]. 中南药学, 2009,7(10):724-728 [10] 丁学琨, 娄秀华, 张晖芬. 正交实验设计优化槲皮素明胶微球制备工艺及体外释药特性的评价[J]. 中国民族民间医药,2009,22(1):7 [11] 严佳佳, 李安平, 李先荣. 黄芩苷明胶微球制备工艺研究[J]. 中国中医药信息杂志, 2009,16(1):30-32 [12] WEI Hao-ji, YANG Hang-hsing. Gelatin microspheres encapsulated with a nonpeptide angiogenic agent,ginsenoside Rg1, for intramyocardial injection in a rat model with infarcted myocardium [J]. Journal of Controlled Release, 2007, 120:  27¨C34 [13] 刘琳娜, 李欣, 梅其炳等. 尼莫地平明胶微球的制备及其性质研究[J]. 华西药学杂志, 2006, 21(3):243～245 [13] 丁红,邢桂琴,谢茵. 阿霉素明胶微球的制备与特性研究[J]. 中国药学杂志,2000,20(7):387-389 [14] 郭 军, 彭 博, 周海波等. 关节腔注射用青藤碱明胶微球的制备及性质考察[J].中国药剂学杂志,2008,6(5):256-263 [15] 单友亮, 侯连兵, 陈志良等. 新型左心声学超声造影剂空气白蛋白微球制剂的研制[J]. 中国药房, 2002,13(3):138-140 [16] 吴 红, 范 黎, 张 慧等. 糖类交联明胶微球的制备及其释药特性研究[J]. 中国药房, 2008,19( 1):36-39 [17] LU Yang. Studies on the influence of gelatins! IEP on the dispersivity of gelatin microspheres[J]. The Science and Technology of Gelatin, 2005, 25(4): 105109 [18] Xiong ZP, Zhang YD , Huang F, et al. Transhepatic arterial chemo embo2lization with gemcitabine and carboplatin for the treatment of stage III hepatocellular carcinoma [J ]. Zhonghua Zhongliu Zazhi , 2007 , 29(8): 6232625. [19] 傅静娟, 欧宁, 徐 群为. 苦杏仁苷明胶微球的制备及其工艺优化[J]. 南京工业大学学报,2010,23(4):91-95 [20] 孙瑞雪, 史京京, 郭燕川. 明胶微球粒径影响因素的研究[J]. 明胶科学与技术,2008,28(3):119-124 致  谢 在毕业设计的实验和本论文的写作过程中，得到肖莉老师的精心鼓励和热忱的指导.肖莉老师的研究热情、丰富的学科知识和严谨的工作作风使我受益匪浅，将是我今后学习和工作的楷模.肖老师对我的实验提出了很多意见，而且指导实验的整个步骤，从最初的论文选题到实验工作乃至论文的写作都倾注了这位老师的大量心血.整个毕业设计阶段的学习使我受益终身，特在此向肖老师表示深深的敬意和诚挚的感谢！另外非常感谢康青等同学在实验过程中的帮助及提出的宝贵意见.

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